生物转化常见反应类型-课件.ppt

1、第三章 介绍生物转化的常见反应类型以甾体化合物的生物转化为例进行阐述以甾体化合物的生物转化为例进行阐述甾体化合物和甾体药物简介 甾体化合物结构 甾类化合物常见种类1ppt课件甾体化合物和甾体药物简介19521952年，美国普强药厂的年，美国普强药厂的MorrayMorray和和PereroonPereroon首次利用黑根霉将黄体同首次利用黑根霉将黄体同转化为转化为1111 黄体酮，人们开始认识到甾体微生物转化在甾体药物生产黄体酮，人们开始认识到甾体微生物转化在甾体药物生产中的重要性。中的重要性。微生物几乎对甾体的每个位置都能进行转化。微生物几乎对甾体的每个位置都能进行转化。几种重要的甾体微生物

2、转化发应如羟化，脱氢成为工业上生产甾体激几种重要的甾体微生物转化发应如羟化，脱氢成为工业上生产甾体激素及其类似物的重要手段素及其类似物的重要手段2ppt课件甾体化合物一类含有环戊烷多菲核的化合物在甾核的第10，13位常常含有角甲基；在3，11,17位，可能有羟基、酮基；A，B环有部分双键；17位有不同的测链。3ppt课件目前甾体微生物转化中受到人们广泛关注的领域将微生物基因工程的新技术应用于甾体微生物转化将微生物基因工程的新技术应用于甾体微生物转化提高水不容性底物的溶解度提高水不容性底物的溶解度细胞和酶的固定化以利于酶的重复经济利用细胞和酶的固定化以利于酶的重复经济利用发展经济有效的产物连续回

3、收方式发展经济有效的产物连续回收方式将环糊精等应用于培养基以提高产量将环糊精等应用于培养基以提高产量4ppt课件甾体化合物结构菲环戊烷多氢菲5ppt课件甾体化合物编号2345167891413121115环戊烷多氢菲1016176ppt课件甾类化合物常见种类 动物组织中动物组织中：胆固醇、胆酸、皮脂素、皮脂醇（氢化可的松）、胆固醇、胆酸、皮脂素、皮脂醇（氢化可的松）、皮脂酮等皮脂酮等 睾酮、雄酮、孕酮、雌二醇等生殖腺激素。睾酮、雄酮、孕酮、雌二醇等生殖腺激素。植物中植物中：薯芋皂豆甾醇薯芋皂豆甾醇 酵母细胞酵母细胞：麦角固醇麦角固醇7ppt课件甾体化合物编号234516789141312111

4、5环戊烷多氢菲1016178ppt课件甾类化合物常见种类 动物组织中动物组织中：胆固醇、胆酸、皮脂素、皮脂醇（氢化可的松）、胆固醇、胆酸、皮脂素、皮脂醇（氢化可的松）、皮脂酮等皮脂酮等 睾酮、雄酮、孕酮、雌二醇等生殖腺激素。睾酮、雄酮、孕酮、雌二醇等生殖腺激素。植物中植物中：薯芋皂豆甾醇薯芋皂豆甾醇 酵母细胞酵母细胞：麦角固醇麦角固醇9ppt课件甾体类激素药肾上腺皮脂激素类肾上腺皮脂激素类 可的松、强的松、氢化可的松可的松、强的松、氢化可的松 功能：功能：抗炎、抗毒、抗过敏抗炎、抗毒、抗过敏 对风湿、类风湿性关节炎、红斑狼疮等有治对风湿、类风湿性关节炎、红斑狼疮等有治疗作用。疗作用。生殖腺激素

5、生殖腺激素 孕酮、雌酮孕酮、雌酮 功能：功能：调节内分泌调节内分泌人工合成避孕药人工合成避孕药 长效孕酮等长效孕酮等10ppt课件微生物在甾体药物生产中的应用 主要分为两大类主要分为两大类将天然原料转化为生产甾体化合物的普通中间体。将天然原料转化为生产甾体化合物的普通中间体。如植物皂角苷羟化生成皂角苷配基如植物皂角苷羟化生成皂角苷配基 降解甾醇边链生成有用的甾体化合物中间体，降解甾醇边链生成有用的甾体化合物中间体，雄甾雄甾4 4烯烯3 3，1717二酮；二酮；雄甾雄甾1 1，4 4二烯二烯3 3，1717二酮。二酮。转化成特殊的甾体化合物的中间体，以生产我们所转化成特殊的甾体化合物的中间体，以

6、生产我们所需要的产物。需要的产物。如：甾体如：甾体1111，1111 及及1616 羟化，羟化，1 1 脱氢脱氢 甾体边链降解甾体边链降解11ppt课件微生物对甾体化合物的转化微生物对甾体化合物的转化多种多样微生物对甾体化合物的转化多种多样它们对甾体的每一位置上的原子或基团都有可能它们对甾体的每一位置上的原子或基团都有可能进行生物转化。进行生物转化。其反应类型主要有氧化、还原、水解、酯化等等。其反应类型主要有氧化、还原、水解、酯化等等。包括甾体母核上和测链上的某个位置的羟基化、包括甾体母核上和测链上的某个位置的羟基化、酮基化、环氧化、脱氢形成双链、芳香化、开环、酮基化、环氧化、脱氢形成双链、芳

7、香化、开环、形成内酯、侧链断裂、降解。形成内酯、侧链断裂、降解。12ppt课件羟基化反应是甾体微生物转化中最重要的反应。化学法除了较容易在C17引入羟基外，在其他位置都很难引入羟基。13ppt课件微生物对甾体的羟基化作用微生物能在甾体的任何位置进行羟基化发应，微生物能在甾体的任何位置进行羟基化发应，也可在非甾类有机分子上羟基化。也可在非甾类有机分子上羟基化。简单的羟基化作用是在甾体的某个位置上引入简单的羟基化作用是在甾体的某个位置上引入O O原子。原子。在甾核上至少有在甾核上至少有2121个位置可以发生。个位置可以发生。1111位羟基化作用最重要，位羟基化作用最重要，1111位位C C的氧化对

8、可的的氧化对可的松药物疗效是不可缺少的，松药物疗效是不可缺少的，1111，1111。除除1111位位C C进行羟基化反应外，进行羟基化反应外，9 9，1414，1616 的的羟基化，在制备甾体药物时，生产皮质甾类化羟基化，在制备甾体药物时，生产皮质甾类化合物及其类似物。合物及其类似物。14ppt课件进行甾体羟基化作用的微生物转化物质转化物质作用位置作用位置微生物代表微生物代表孕酮孕酮1111 1111 黑根霉、黑曲霉、腊状杆菌等黑根霉、黑曲霉、腊状杆菌等弯曲孢霉弯曲孢霉化合物化合物S S1111 1111 黑根霉、黑曲霉、焦曲霉构巢曲黑根霉、黑曲霉、焦曲霉构巢曲霉霉假单孢杆菌、弗氏链霉菌、梨头

9、假单孢杆菌、弗氏链霉菌、梨头霉霉1111脱氧皮脂酮脱氧皮脂酮1111 弯月弯孢霉弯月弯孢霉雌二醇雌二醇1616 巨大芽孢杆菌巨大芽孢杆菌15ppt课件羟基化反应机理16ppt课件羟基化反应由于这些酶能将一摩尔分子氧引入底物，因由于这些酶能将一摩尔分子氧引入底物，因此被定义位单氧化酶。此被定义位单氧化酶。这种细胞色素这种细胞色素p450依赖的单氧化酶存在于几依赖的单氧化酶存在于几乎所有形式的生命体中，以游离或膜结合的乎所有形式的生命体中，以游离或膜结合的形式存在。形式存在。17ppt课件同位素实验证明18ppt课件甾体羟基化中存在的问题19ppt课件环糊精的生理作用 HesselinkHesse

10、link等研究：等研究：应用环糊于分枝杆菌甾体边链的降解。应用环糊于分枝杆菌甾体边链的降解。环糊精是一种环状寡聚糖，一般由环糊精是一种环状寡聚糖，一般由6 68 8个葡萄糖分子通过个葡萄糖分子通过 1 1，4 4糖糖苷键连接而成。苷键连接而成。易溶于水。易溶于水。含有疏水性空腔，可与疏水性分子结合。含有疏水性空腔，可与疏水性分子结合。可作为几种甾体类药物的稳定剂和增溶剂可作为几种甾体类药物的稳定剂和增溶剂。20ppt课件环糊精的应用实例1Chincholkar Chincholkar 等研究了在等研究了在 环糊精存在时，环糊精存在时，Currularia VKMF-644Currularia

11、VKMF-644对对1111脱氢皮甾醇（脱氢皮甾醇（Reichstein SReichstein S化合物，简称化合物，简称化合物化合物S S）的）的1111 羟基化。羟基化。在底物浓度为在底物浓度为4g/L4g/L时：时：化合物化合物S S：CDCD1.0:0.6 1.0:0.6 氢化可的松氢化可的松的产率为的产率为70707575无无 CDCD：氢化可的松的产率为氢化可的松的产率为4040505021ppt课件环糊精的应用实例2GDGD：1919去甲基去甲基1313乙基雄甾乙基雄甾4 4烯烯3 3，1717双酮双酮 经经Penicillium raistrickiiPenicillium

12、raistrickii进行进行1515 羟基化羟基化口服避孕药口服避孕药5 5D D十八甲基炔诺酮（十八甲基炔诺酮（gestodenegestodene）的重）的重要中间体。要中间体。SchlosserSchlosser等研究表明：在等研究表明：在 环糊精环糊精存在时，菌株或其固定化细胞对存在时，菌株或其固定化细胞对CDCD的的1515 羟基化作用，与以甲醇做溶剂比较，羟基化作用，与以甲醇做溶剂比较，其转化率都能明显提高其转化率都能明显提高。22ppt课件 环糊精作用 环糊精有利于提高甾体底物溶解度环糊精有利于提高甾体底物溶解度真菌能以真菌能以 环糊精作为环糊精作为C C源源23ppt课件其他

13、重要的羟基化反应地索高诺酮（地索高诺酮（destogestreldestogestrel）新型避孕药（荷新型避孕药（荷兰兰OrganonOrganon公司推出）公司推出）作用：月经周期控制好，副作用少，避孕可靠作用：月经周期控制好，副作用少，避孕可靠我国研究：上海医科大学史纪平我国研究：上海医科大学史纪平1919去甲基去甲基1313乙基雄甾乙基雄甾4 4烯烯3 3，1717双双酮酮1111 羟基化羟基化（金龟子绿僵菌）形成关键中间（金龟子绿僵菌）形成关键中间体体简化合成路线，降低副反应。简化合成路线，降低副反应。底物：底物：0.2%0.2%转化率：转化率：363624ppt课件甾体的边链降解2

14、5ppt课件侧链降解微生物对甾体侧链的降解，解决了天然甾体化合物作原料合成甾体激素微生物对甾体侧链的降解，解决了天然甾体化合物作原料合成甾体激素的问题，为利用原价的原料开辟了新的途径。的问题，为利用原价的原料开辟了新的途径。常见微生物有：常见微生物有：简单节杆菌简单节杆菌球形芽孢杆菌球形芽孢杆菌玫瑰芽孢杆菌玫瑰芽孢杆菌淡紫青霉淡紫青霉藤黄诺卡氏菌藤黄诺卡氏菌26ppt课件甾体边链降解甾体边链降解甾体母核降解甾体母核降解27ppt课件28ppt课件3 3 羟基羟基5 5甾醇甾醇 9 羟基化，羟基化，1，2脱氢脱氢3酮酮4化合物化合物 微生物种类不同微生物种类不同1，2脱氢，脱氢，9 羟基化羟基化

15、氧 化29ppt课件 甾体边链降解采用类似脂肪酸采用类似脂肪酸 氧化的氧化过程，最后形成氧化的氧化过程，最后形成C C1717酮甾体。酮甾体。30ppt课件31ppt课件选择性边链降解问题选择性边链降解策略（选择性边链降解策略（3 3）辅助基因工程辅助基因工程提高边链降解的产率策略提高边链降解的产率策略32ppt课件选择性甾体边链降解措施1 对甾醇进行结构改造，从而阻止酶对母核的降对甾醇进行结构改造，从而阻止酶对母核的降解解 例如：例如：1965 Sih1965 Sih等等 将胆固醇先行改造为将胆固醇先行改造为1919羟基衍生物羟基衍生物 再经一步微生物转化为再经一步微生物转化为A A环芳香化

16、的雌酚酮。环芳香化的雌酚酮。33ppt课件选择性甾体边链降解措施2加入酶抑制剂，抑制母核降解关键酶如：加入酶抑制剂，抑制母核降解关键酶如：C C 1 1，2 2脱脱氢酶和氢酶和9 9 羟化酶。羟化酶。如：如：Ni Co Pb SeNi Co Pb Se 8 8羟基喹啉应用于多种分枝杆菌对胆固醇的羟基喹啉应用于多种分枝杆菌对胆固醇的选性边链降解选性边链降解 金属鳌合剂金属鳌合剂 2 2，2 2双联吡啶双联吡啶 抑制母核降解抑制母核降解34ppt课件选择性甾体边链降解措施3对菌株进行诱变，产生仅降解甾醇侧链的突变株对菌株进行诱变，产生仅降解甾醇侧链的突变株例如：例如：原始菌株经诱变为原始菌株经诱变

17、为 诱变菌株诱变菌株Mycobacterium spMycobacterium sp，NRRL-B3683NRRL-B3683 不加抑制剂，便产生雄甾不加抑制剂，便产生雄甾1 1，4 4二烯二烯3 3，1717二酮（二酮（ADDADD）再诱变得再诱变得Mycobacterium spMycobacterium sp，NRRL-B3805NRRL-B3805，无无C C 1 1，2 2脱氢酶脱氢酶 能产生雄甾能产生雄甾4 4烯烯3 3，1717二酮（二酮（ADAD）35ppt课件基因工程新技术的应用专利：专利：PseudomonasPseudomonas 菌株无降解甾体的能力菌株无降解甾体的能力

18、将将Mycobacterium sp NRRL-3683Mycobacterium sp NRRL-3683 的的DNADNA导入导入PseudomonasPseudomonas 菌株中获得菌株中获得重组菌。重组菌。重组菌可在水相，一种或几种有机相中进行转化反应。重组菌可在水相，一种或几种有机相中进行转化反应。PseudomonasPseudomonas 菌株比菌株比Mycobacterium spMycobacterium sp NRRL-3683 NRRL-3683的生长输率快的生长输率快结果加快转化进程，降低成本结果加快转化进程，降低成本。36ppt课件方法分离纯化分离纯化Mycobac

19、terium spMycobacterium sp NRRL-3683 NRRL-3683 的的DNADNA整合到特定质粒载体中整合到特定质粒载体中导入导入 噬菌体中噬菌体中用入用入 噬菌体感染噬菌体感染E.coli E.coli HB101HB101，得，得E.coliE.coli重组子重组子三亲杂交实现三亲杂交实现Mycobacterium spMycobacterium sp NRRL-3683 NRRL-3683 的的DNADNA到到PseudomonasPseudomonas 菌菌株得转移。株得转移。37ppt课件如何提高甾体边链降解的产率接触接触38ppt课件提高甾体边链降解速率H

20、esselinkHesselink等研究表明：环糊精能明显增强等研究表明：环糊精能明显增强Mycobacterium spMycobacterium sp NRRL-NRRL-3683 3683 降解胆固醇、谷甾醇等边链生成降解胆固醇、谷甾醇等边链生成ADAD的产率，不影响细胞生长速的产率，不影响细胞生长速度和细胞密度。度和细胞密度。当环糊精：底物浓度当环糊精：底物浓度=2:1=2:1时，微生物降解边链的活性可增加时，微生物降解边链的活性可增加1.7-3.01.7-3.0倍。倍。环糊精能阻止母核的降解及产物的反馈抑制。环糊精能阻止母核的降解及产物的反馈抑制。39ppt课件环糊精在甾体边链降解中

21、的作用总结在甾体边链降解过程中，环糊精充当：在甾体边链降解过程中，环糊精充当：惰性甾体增溶剂惰性甾体增溶剂反应载体反应载体保护剂保护剂40ppt课件甾体边链降的成功应用 Arhna Arhna 和和SihSih等研究报道以胆甾醇和等研究报道以胆甾醇和 谷甾醇为原料谷甾醇为原料微生物转化法合成甾体药物中间体的方法。微生物转化法合成甾体药物中间体的方法。采用酶抑制剂采用酶抑制剂生化阻断变株生化阻断变株改变细胞膜通透性等生物技术改造甾醇的结构，从而改变细胞膜通透性等生物技术改造甾醇的结构，从而选择性控制甾醇的边链降解选择性控制甾醇的边链降解成功合成中间体成功合成中间体 雄甾雄甾4 4烯烯3 3，17

22、17二酮（二酮（4 4 ADAD）雄甾雄甾1 1，4 4二烯二烯3 3，1717二酮（二酮（ADDADD）9 9 羟基羟基4 4ADAD目的：工业生产性激素，利尿剂等甾体药物目的：工业生产性激素，利尿剂等甾体药物41ppt课件其他的甾体生物转化反应类型脱氢作用脱氢作用A A环芳香环芳香42ppt课件脱氢作用使甾体核形成双键强的松（去氢可的松）强的松（去氢可的松）是可的松经脱氢而形成的。是可的松经脱氢而形成的。其抗炎功效比可的松高几倍。一般制备该种药物时，常常是将其抗炎功效比可的松高几倍。一般制备该种药物时，常常是将可的松或氢化可的松脱氢变为去氢可的松或去氢氢化可的松。可的松或氢化可的松脱氢变为

23、去氢可的松或去氢氢化可的松。43ppt课件脱氢反应的常见微生物为 简单节杆菌简单节杆菌 各种芽孢杆菌（蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌）各种芽孢杆菌（蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌）镰刀霉镰刀霉 长蠕孢菌属。长蠕孢菌属。44ppt课件A环芳香化 所谓所谓A A环芳香化环芳香化 是指甾体是指甾体A A环核上的每个环核上的每个C C原子都脱氢形成双键，而变为芳香化结原子都脱氢形成双键，而变为芳香化结构。构。雌性激素的生产（雌二醇），可通过此方法获得雌性激素的生产（雌二醇），可通过此方法获得45ppt课件研究生物转化的几种常用方法研究生物转化的几种常用方法46ppt课件第四章 研究生物转化的几种常用方法间歇培

24、养法间歇培养法整体细胞转化法整体细胞转化法洗涤均丝悬浮法（静息细胞法）洗涤均丝悬浮法（静息细胞法）孢子转化法孢子转化法原生质体实验法原生质体实验法遗传特性诱变法遗传特性诱变法同位素示踪法同位素示踪法47ppt课件间歇培养法（Batch culture)这种方法能够比较直接而简单地筛选能否具有转化某种化合物的活性菌这种方法能够比较直接而简单地筛选能否具有转化某种化合物的活性菌株。株。48ppt课件游离的整体细胞游离的整体细胞直接作为催化剂来制造产品的报道已经不少游离的整体细胞直接作为催化剂来制造产品的报道已经不少在某种程度优于固定化细胞在某种程度优于固定化细胞在生物转化酶工程中越来越受到重视在生

25、物转化酶工程中越来越受到重视游离整体细胞的基础研究更为重要游离整体细胞的基础研究更为重要49ppt课件游离整体细胞的基础研究内容细胞的渗透化细胞的渗透化酶的胞内固定化酶的胞内固定化酶细胞在反应前后的形态变化和结构变化酶细胞在反应前后的形态变化和结构变化50ppt课件整体细胞转化应用举例底物：富马酸底物：富马酸产物产物L L天冬氨酸天冬氨酸生物转化酶：天冬氨酸酶（生物转化酶：天冬氨酸酶（EC4.3.1.1EC4.3.1.1）转化菌株：转化菌株：E.coliE.coli51ppt课件整体细胞转化研究底物浓度细胞形态与结构催化反应速度细胞的渗透性关系52ppt课件培养基53ppt课件培养方法54pp

26、t课件55ppt课件不同底物浓度的反应速率底物质量浓度较高时，在某一时间（底物质量浓度较高时，在某一时间（8h8h）前，转化速率较低，而后，）前，转化速率较低，而后，反应速度加快。反应速度加快。对底物富马酸盐的转化彻底。（对底物富马酸盐的转化彻底。（99.299.2）底物浓度较低时，反应速度始终较慢底物浓度较低时，反应速度始终较慢 对底物富马酸盐的转化不彻底。（对底物富马酸盐的转化不彻底。（6363）特点：特点：高质量底物浓度有较高的反应速率高质量底物浓度有较高的反应速率高质量浓度底物有较高的转化率高质量浓度底物有较高的转化率催化反应一般有个迟滞期催化反应一般有个迟滞期56ppt课件酶细胞在生

27、物转化中的形态变化低底物浓度扫描观察57ppt课件酶细胞在生物转化中的形态变化高底物浓度扫描观察58ppt课件形态学变化高质量底物浓度下细胞发生明显的形态学变化高质量底物浓度下细胞发生明显的形态学变化 细胞表面发上皱褶，有明显的凹陷细胞表面发上皱褶，有明显的凹陷 细胞膜变薄，松弛、不明显，内部结构变松，不致密。细胞膜变薄，松弛、不明显，内部结构变松，不致密。59ppt课件高质量浓度底物对含酶细胞的渗透化作用60ppt课件61ppt课件静息细胞法 为了排除原培养基中自身的代谢产物对不同生为了排除原培养基中自身的代谢产物对不同生长阶段转化的影响，常常用洗涤的静息细胞来代长阶段转化的影响，常常用洗涤

28、的静息细胞来代替发酵液中的生长的细胞，即将不同生长阶段的替发酵液中的生长的细胞，即将不同生长阶段的细胞取出，洗去沾染的原培养液及其代谢产物，细胞取出，洗去沾染的原培养液及其代谢产物，然后把细胞悬浮在人工转化系统内，在一定条件然后把细胞悬浮在人工转化系统内，在一定条件 下进行生物转化。下进行生物转化。62ppt课件孢子转化法 真菌的分生孢子和子囊孢子，往往含有的酶真菌的分生孢子和子囊孢子，往往含有的酶活力高，且常常用于生物转化。活力高，且常常用于生物转化。细菌的内生孢子（芽孢），一般无转化活性。细菌的内生孢子（芽孢），一般无转化活性。63ppt课件转化方法相似于静息细胞法。相似于静息细胞法。不采

29、用完全培养基，只选用缓冲液或含有葡萄糖一类能源的物质即可。不采用完全培养基，只选用缓冲液或含有葡萄糖一类能源的物质即可。通常转化时使用的孢子浓度为通常转化时使用的孢子浓度为10108 810109 9个个/ml./ml.转化转化pHpH一般为一般为5-65-664ppt课件原生质体试验法方法方法 通过溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶等脱去细胞壁，获得原生质体。通过溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶等脱去细胞壁，获得原生质体。将原生质体悬浮于高渗稳定液中，添加前体物质，进行喂养试验，将原生质体悬浮于高渗稳定液中，添加前体物质，进行喂养试验，观察结果。观察结果。65ppt课件原生质体试验法特点排除了细胞壁通透性障碍

30、。排除了细胞壁通透性障碍。保全了整体细胞的内酶系统。保全了整体细胞的内酶系统。避免了无细胞抽提法中，用破碎细胞而损坏了酶体系，从而使某些需要避免了无细胞抽提法中，用破碎细胞而损坏了酶体系，从而使某些需要偶联的酶反应（氧化还原反应）不能进行的缺点。偶联的酶反应（氧化还原反应）不能进行的缺点。66ppt课件遗传特性诱变法菌种诱变不仅是提高产量的重要手段，而且也是研菌种诱变不仅是提高产量的重要手段，而且也是研究生物转化过程中，产物形成的遗传机制的一种究生物转化过程中，产物形成的遗传机制的一种有效方法。有效方法。将转化菌进行诱变，使其失去转化底物或形成某个将转化菌进行诱变，使其失去转化底物或形成某个中

31、间体的能力，从而就可分离到生物转化中的各中间体的能力，从而就可分离到生物转化中的各种不同的障碍突变株，即负突变株。这种负突变种不同的障碍突变株，即负突变株。这种负突变株能够积累某种代谢产物或支路代谢产物。从分株能够积累某种代谢产物或支路代谢产物。从分析转化菌和突变株的代谢产物化学结构上的析转化菌和突变株的代谢产物化学结构上的 差异，差异，找出这些代谢产物在合成中的相互关系，从而可找出这些代谢产物在合成中的相互关系，从而可推断生物转化的反应步骤。推断生物转化的反应步骤。67ppt课件同位素示踪法同位素示踪法是研究生物转化的好方法。即应同位素示踪法是研究生物转化的好方法。即应用同位素转化的起始物和

32、中间体进行喂养试用同位素转化的起始物和中间体进行喂养试验，由于试验菌没有区别标记化合物及非标验，由于试验菌没有区别标记化合物及非标记化合物的能力，因此标记化合物和非标记记化合物的能力，因此标记化合物和非标记化合物一样，都能参与菌体的代谢变化，然化合物一样，都能参与菌体的代谢变化，然后通过测定产物或中间体的同位素含量及分后通过测定产物或中间体的同位素含量及分布情况，从而判断试验化合物是否参与生物布情况，从而判断试验化合物是否参与生物转化。转化。缺点缺点为了确定同位素的结合位置，必须将产物进行为了确定同位素的结合位置，必须将产物进行一系列的化学降解、分离和测定等大量工作。一系列的化学降解、分离和测

33、定等大量工作。68ppt课件近年研究概况近年来，利用没有放射性的稳定同位素近年来，利用没有放射性的稳定同位素1313C C、2 2H H、1515N N、1818O O等来作示踪研究，特别是等来作示踪研究，特别是1313C C，可应用，可应用碳核磁共振仪来直接测定该生物转化产物中间碳核磁共振仪来直接测定该生物转化产物中间体的碳核磁共振谱，从核磁共振谱的解析中，体的碳核磁共振谱，从核磁共振谱的解析中，便可知道该示踪原子被结合到产物或中间体的便可知道该示踪原子被结合到产物或中间体的分子结构中的位置和分布情况。分子结构中的位置和分布情况。由于这项工作可在实验室完成，不仅简化了大量由于这项工作可在实验室完成，不仅简化了大量的化学降解和分析测定步骤，而且保证工作人的化学降解和分析测定步骤，而且保证工作人员的健康和推进研究工作的进展。员的健康和推进研究工作的进展。69ppt课件